En este experimento los estudiantes realmente purifican la enzima de restricción Eco RI. Este procedimiento utiliza un paso de cromatografía de intercambio iónico para la purificación de Eco RI.
Las fracciones de la columna se ensayan para la enzima utilizando ADN del fago Lambda y los productos de la digestión se identifican por electroforesis en gel de agarosa. Las fracciones que contienen Eco RI se identifican y se agrupan.
Las actividades totales y específicas se calculan.
Kit contiene:
Matria de intercambio iónico, columnas de cromatografía, extracto celular de E.coli, tampón de equilibrio y elución, lambda DNA; marcador lambda/Eco RI, KCl, glicerol, tampón de dilución y reacción, agarosa, TAE y método de tinción.
Se necesita:
Microondas o placa calefactora, sistema de electroforesis horizontal, balanza ,micropipetas para sembrar el gel, baño de agua, transiluminador UV, microcentrifuga, espectrofotómetro y cubetas, pipetas 10 ml, material de vidrio y hielo.el gel y baño de agua.
|
